Dithiothreitol (DTT) se yon ajan reduktè ki souvan itilize, ke yo rele tou nouvo aditif vèt la. Li se yon ti konpoze òganik molekilè ak de gwoup merkaptan (-SH). Akòz pwopriyete reduktè ak estabilite li yo, DTT lajman itilize nan eksperyans byochimik ak byoloji molekilè.
Wòl prensipal DTT a se pou diminye lyezon disulfid nan pwoteyin ak lòt biomolekil. Lyezon disulfid la se yon pati enpòtan nan pliye ak estabilite pwoteyin, men anba sèten kondisyon eksperimantal, tankou analiz SDS-PAGE rediksyonab, rekombinasyon ak pliye pwoteyin, li nesesè pou diminye lyezon disulfid la an de gwoup tiol pou demele estrikti espasyal pwoteyin nan. DTT ka reyaji avèk lyezon disulfid pou redwi yo an gwoup merkaptan, kidonk ouvri estrikti espasyal pwoteyin nan epi fè li fasil pou analize ak manipile.
Yo kapab itilize DTT tou pou pwoteje aktivite ak estabilite anzim lan. Nan kèk reyaksyon katalize pa anzim, oksidan an ka diminye aktivite anzim lan. DTT ka reyaji avèk oksidan yo pou redwi yo an sibstans ki pa danjere, kidonk pwoteje aktivite ak estabilite anzim lan.
Konpare ak ajan reduktè tradisyonèl yo tankou β-mercaptoethanol (β-ME), DTT konsidere kòm yon ajan reduktè ki pi an sekirite e ki pi estab. Li pa sèlman estab nan solisyon akeuz, men li kenbe pwopriyete reduktè li yo tou nan tanperati ki wo ak nan kondisyon asid-baz.
Itilizasyon DTT a relativman senp. An jeneral, yo fonn DTT nan yon tanpon apwopriye epi answit yo ajoute l nan sistèm eksperimantal la. Yo bezwen detèmine konsantrasyon DTT optimal la selon eksperyans espesifik la, epi jeneralman yo itilize l nan yon seri 0.1-1mM. Konsantrasyon ki pi ba yo ka diminye efè negatif sou kwasans selilè epi yo ka diminye sitotoksisite akòz surekspresyon pwoteyin sib yo. Konsantrasyon ki pi wo yo ka lakòz yon chay metabolik selilè twòp, sa ki afekte kwasans selilè ak efikasite ekspresyon an.
Fason pou detèmine konsantrasyon optimal la se evalye nivo ekspresyon pwoteyin sib la lè w fè tès endiksyon IPTG nan diferan konsantrasyon. Tès kilti sou ti echèl ka fèt lè w itilize yon seri konsantrasyon IPTG (pa egzanp 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, elatriye) epi efè ekspresyon an nan diferan konsantrasyon ka evalye lè w detekte nivo ekspresyon pwoteyin sib la (pa egzanp Western blot oswa deteksyon fliyoresans). Selon rezilta eksperimantal yo, konsantrasyon ki gen pi bon efè ekspresyon an te chwazi kòm konsantrasyon optimal la.
Anplis de sa, ou ka al gade tou literati ki enpòtan an oswa eksperyans lòt laboratwa pou konprann ranje konsantrasyon IPTG ki souvan itilize anba kondisyon eksperimantal menm jan an, epi optimize epi ajiste selon bezwen eksperimantal yo.
Li enpòtan pou sonje ke konsantrasyon optimal la ka varye selon diferan sistèm ekspresyon, pwoteyin sib, ak kondisyon eksperimantal, kidonk li pi bon pou optimize sou yon baz ka pa ka.
An rezime, DTT se yon ajan reduktè ki souvan itilize pou diminye lyezon disulfid nan pwoteyin ak lòt byomolekil epi pou pwoteje aktivite ak estabilite anzim yo. Li te lajman itilize nan eksperyans byochimik ak byoloji molekilè.
Dat piblikasyon: 28 septanm 2023