Dithiothreitol (DTT) se yon ajan diminye souvan itilize, ke yo rele tou nouvo aditif vèt la.Li se yon ti konpoze molekilè òganik ak de gwoup mercaptan (-SH).Akòz pwopriyete diminye li yo ak estabilite, DTT se lajman ki itilize nan byochimik ak eksperyans byoloji molekilè.
Wòl prensipal DTT se diminye lyezon disulfid nan pwoteyin ak lòt biomolekil.Kosyon disulfide la se yon pati enpòtan nan plisman pwoteyin ak estabilite, men anba sèten kondisyon eksperimantal, tankou analiz SDS-PAGE rediksyon, rekonbinasyon pwoteyin ak plisman, li nesesè pou diminye kosyon disulfid la a de gwoup thiol pou debouche estrikti espasyal la nan. pwoteyin nan.DTT ka reyaji ak lyezon disulfid pou redwi yo nan gwoup mercaptan, konsa louvri estrikti nan espasyal nan pwoteyin nan epi fè li fasil analize ak manipile.
DTT kapab tou itilize pou pwoteje aktivite anzim ak estabilite.Nan kèk reyaksyon anzim katalize, aktivite anzim la ka redwi pa oksidan an.DTT ka reyaji ak oksidan pou diminye yo nan sibstans ki inofansif, kidonk pwoteje aktivite ak estabilite anzim la.
Konpare ak ajan rediksyon tradisyonèl tankou β-mercaptoethanol (β-ME), DTT konsidere kòm yon ajan diminye pi an sekirite ak pi estab.Li se pa sèlman ki estab nan solisyon akeuz, men tou, kenbe pwopriyete diminye li yo anba tanperati ki wo ak kondisyon asid-baz.
Itilizasyon DTT relativman senp.An jeneral, DTT fonn nan yon tanpon ki apwopriye epi ajoute nan sistèm eksperimantal la.Konsantrasyon pi bon nan DTT bezwen yo dwe detèmine dapre eksperyans espesifik la, epi jeneralman yo itilize nan seri a nan 0.1-1mM.Konsantrasyon ki pi ba yo ka diminye efè negatif sou kwasans selil epi yo ka diminye sitotoksisite akòz twòp ekspresyon nan pwoteyin sib yo.Pi wo konsantrasyon ka lakòz twòp fado metabolik selilè, ki afekte kwasans selil ak efikasite ekspresyon.
Fason pou detèmine konsantrasyon pi bon an ka evalye nivo ekspresyon pwoteyin sib la lè w fè tès endiksyon IPTG nan diferan konsantrasyon.Tès kilti ti-echèl yo ka fèt lè l sèvi avèk yon seri de konsantrasyon IPTG (egzanp 0.1 mM, 0.5 mM, 1 mM, elatriye) epi yo ka evalye efè ekspresyon nan diferan konsantrasyon lè yo detekte nivo ekspresyon pwoteyin sib la (egzanp Western. blot oswa deteksyon fliyoresan).Dapre rezilta eksperimantal yo, yo te chwazi konsantrasyon ki gen pi bon efè ekspresyon kòm konsantrasyon optimal.
Anplis de sa, ou ka refere tou a literati ki enpòtan oswa eksperyans nan lòt laboratwa yo konprann ranje konsantrasyon IPTG souvan itilize nan kondisyon eksperimantal menm jan an, ak Lè sa a, optimize ak ajiste selon bezwen yo eksperimantal.
Li enpòtan pou sonje ke konsantrasyon pi bon an ka varye selon diferan sistèm ekspresyon, pwoteyin sib, ak kondisyon eksperimantal, kidonk li pi bon pou optimize sou yon baz ka-pa-ka.
An rezime, DTT se yon ajan diminye souvan itilize ki ka itilize pou diminye lyezon disulfid nan pwoteyin ak lòt byomolekil ak pwoteje aktivite anzim ak estabilite.Li te lajman itilize nan byochimik ak byoloji molekilè eksperyans.
Tan pòs: 28-Sep 2023